- Що це означає?
- Аналіз на РНК вірусу гепатиту С
- РНК вірусу гепатиту С: метод ПЛР
- РНК гепатиту С: якісний аналіз
- РНК гепатиту С: кількісний аналіз
- Гепатит С: аналізи і розшифровка
«Виявлення генів вірусу гепатиту С (HVC) в крові пацієнта є другим етапом лабораторної діагностики цієї інфекційної патології. Щоб виявити збудника, який не має клітинної мембрани і, відповідно, поверхневих антигенів, використовують метод полімеразної ланцюгової реакції. За допомогою цього методу визначають безпосередньо молекулу, в якій закодована вся його генетична інформація - РНК.
зміст
Що це означає?
Аналіз на РНК вірусу гепатиту С
РНК вірусу гепатиту С: метод ПЛР
РНК гепатиту С: якісний аналіз
РНК гепатиту С: кількісний аналіз
Гепатит С: аналізи і розшифровка
РНК - Рибонуклеїнова кислота, поряд з ДНК входить до складу клітин всіх живих організмів. Вірус гепатиту С містить молекулу РНК і має здатність до її мутацій.
Дослідження на наявність генома HVC призначають зазвичай після того, як проводять загальний, біохімічний аналіз крові і отримують позитивну відповідь на антитіла (anti-HVC).
Що це означає?
Дослідження на антитіла до HVC є скринінговим, тобто з його допомогою можна обстежувати великі контингенти населення (медиків, вагітних, пацієнтів стаціонарів, донорів, ін'єкційних наркоманів, ВІЛ-інфікованих). Негативний результат лабораторного аналізу anti-HVC говорить про те, що в крові обстежуваного не виявлено імунної реакції на вірус. Негативний результат може бути отриманий в таких випадках:
Якщо людина ніколи не заражався гепатитом С.
Якщо чутливість лабораторної тест-системи виявилася нижчою, ніж концентрація anti-HVC.
Якщо інфікування відбулося менше 2 місяців назад і anti-HVC в крові ще недостатньо для визначення. При псевдонегативну відповіді через людський фактор.
Якщо ж отриманий результат, що антитіла до HVC у хворого виявлені, це означає, що вірус гепатиту С знаходився в організмі обстежуваного на момент проведення дослідження або був в крові деякий час назад. При позитивному результаті на anti-HVC виникає необхідність проведення додаткових лабораторних досліджень, які виявлять генетичний матеріал самого збудника, визначать концентрацію його генів (вірусне навантаження, Віремія) і встановлять генотип.
Аналіз на РНК вірусу гепатиту С
Геном HVC в лабораторних умовах можна виявити за допомогою декількох досліджень:
- розгалуженої ДНК (р-ДНК);
- транскрипционной ампліфікації (ТМА);
- полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).
Метод р-ДНК - недорогий і простий спосіб виявлення вірусного генома у великої кількості обстежуваних людей. Його головним недоліком є низька чутливість: виявляє HVC тільки при його концентрації понад 500 МО / мл.
Метод транскрипционной ампліфікації виявляє в сироватці крові нуклеїнові кислоти вірусу. Аналіз має високу чутливість (5-10 МО / мл), але він ще недостатньо впроваджений в повсюдну лабораторну практику.
Метод ПЛР в Росії є найпоширенішим і доступним лабораторним обстеженням з високою чутливістю (від 50-60 МО / мл).
Дослідження ПЛР виконується в будь-якій клінічній лабораторії, яка має відповідну акредитацію. Дуже важливим нюансом цього методу діагностики, який впливає на результат аналізу, є чутливість використовуваної в лабораторії тест-системи. Наприклад, чутливість диагностикума 60 МО / мл, як в лабораторіях «Інвітро», дозволяє виявляти вірусну РНК через 3 місяці після зараження. При низькій чутливості тест-системи гени збудника можуть не виявлятися навіть через 4 місяці після інфікування.
РНК вірусу гепатиту С: метод ПЛР
Метод ПЛР має безліч переваг перед іншими лабораторними дослідженнями для виявлення генів HVC:
- висока чутливість. Метод дозволяє визначати генетичний матеріал збудника навіть при його мінімальній концентрації в зразку;
- велика специфічність. Виявляє гени вірусу певного генотипу серед безлічі ДНК і РНК інших збудників, що дозволяє проводити генотипування збудника;
- швидкість проведення. Відсутність тривалого процесу культивування збудника скорочує час отримання результату до декількох годин; універсальність аналізу.
Універсальна процедура проведення дослідження дозволяє одночасно використовувати один зразок крові людини для виявлення генетичного матеріалу різних збудників. Ці переваги дозволяють вважати ПЛР «золотим стандартом» лабораторної діагностики вірусного гепатиту С разом з імуноферментним аналізом на anti-HVC.
ПЛР - це дослідження, що використовується для визначення генів HVC в крові обстежуваного людини. Дослідження складається з декількох етапів:
- Відбору зразка біоматеріалу.
- Багаторазового збільшення концентрації копій РНК в відібраному зразку.
- Виявлення генетичного матеріалу за допомогою спеціальних тест-систем.
Після забору венозної крові у пацієнта проводять штучне ініціювання процесу множинного реплицирования (ампліфікації, копіювання) генів HVC.
Для цього певним способом кілька разів змінюють температуру всередині пробірки з біоматеріалом. Коли кількість копій РНК в пробірці досягає необхідного значення, проводять виявлення збудника за допомогою спеціальних тест-діагностикумів.
ПЛР-діагностика буває
- якісної (виявляє присутність вірусу),
- кількісної (визначає концентрацію вірусних генів в одиниці об'єму)
- генотипической (встановлює генотип збудника).
РНК гепатиту С: якісний аналіз
Завдання якісного ПЛР - визначення наявності HVC в представленому біоматеріалу. Це дослідження проводиться зазвичай для скринінгової діагностики захворювання або виявлення носійства. Призначають його після того, як виявлять anti-HVC методом ІФА.
Щоб поставити діагноз гепатиту С, досить виявити генетичний матеріал HCV якісно, тобто без підрахунку його концентрації в обсязі крові. Результатом якісного ПЛР може бути: «РНК виявлено» або «РНК не виявлено».
syringe needle with droplet of blood in front of a finger and on blue bacjground
Точність методу відповідає 95%. При цьому точність самих тест-діагностикумів досягає 100%, а 5% - це людський фактор, який завжди присутній в лабораторних дослідженнях. Щоб уникнути помилково негативні аналізу, особливо у людей з низькою віремією, необхідна висока чутливість застосовуваної в дослідженні діагностичної системи. Чутливість тест-системи повинна бути не меншою, ніж 60 МО / мл.
РНК гепатиту С: кількісний аналіз
Кількісний аналіз призначають тоді, коли потрібно знати рівень віремії в організмі людини. Показаннями для проведення цього дослідження є:
- позитивний результат якісного ПЛР за умови виявлення антитіл до вірусу;
- встановлення стадії патології;
- визначення вірусного навантаження при гепатитах;
- вибір комбінації противірусних препаратів;
- моніторинг вірулогіческого відповіді на проведену противірусну терапію;
- оцінка ймовірності переходу гострого гепатиту С в хронічний.
Результат аналізу виражається в МО / мл (міжнародних одиницях в 1 мл сироватки) або в копіях / мл (кількості копій генів вірусу в 1 мл сироватки). Кількісний ПЛР не має норми: в нормі ген HVC в крові людини виявлятися не повинен. Отримані результати обстеження порівнюють з референсними значеннями, встановленими для тій чи іншій мірі вірусного навантаження.
Так, показники (в МО / мл):
- нижче 4 × 10 * 5 вважаються низькою віремією;
- від 4 × 10 * 5 до 8 × 10 * 5 - середньої;
- понад 8 × 10 * 5 - високу.
Чим більше копій вірусної РНК в крові, тим агресивніше протікає захворювання і більше ризик передачі вірусу оточуючим. Але рівень вірусного навантаження - не єдиний показник, що впливає на тяжкість перебігу патології і подальший прогноз для пацієнта: важливий також генотип збудника.
Встановлення генотипу необхідно для призначення правильної схеми лікування. Від нього також залежить прогноз для здоров'я і життя пацієнта. наприклад, вірус 3 генотипу частіше призводить до фіброзу або цирозу печінки, в порівнянні з пацієнтами носіями 1 генотипу.
Гепатит С: аналізи і розшифровка
РНК Діагноз гепатиту С неможливо поставити тільки за результатами тільки якісного і / або кількісного аналізу ПЛР: визначення HVC і рівня вірусного навантаження недостатньо для призначення адекватної противірусної терапії. Потенційного хворого потрібно обстежити комплексно (клінічно, лабораторно, інструментально), щоб мати об'єктивну картину патології. Правильно призначити комплекс обстежень для встановлення діагнозу гепатиту С, а потім грамотно розшифрувати отримані результати може тільки лікар.
Що це означає?Що це означає?
