Аналіз на Епштейна-Барра: розшифровка, результати

1. Імуноферментний аналіз на ВЕБ
2. ПРЦ-аналіз на вірус Епштейна-Барра
3. Аналіз на вірус Епштейна-Барра у дитини

Важливу роль в діагностиці герпесу 4 типи та інфекційного мононуклеозу медики відводять специфічним аналізам, які допомагають виявити ДНК вірусу або унікальні антитіла в біоматеріалу пацієнта. До основних видів лабораторних досліджень, що застосовуються для виявлення вірусу Епштейна-Барра в організмі людини, відносяться імуноферментний аналіз (ІФА) і ПРЦ-діагностика. Розглянемо докладніше суть обох методів і особливості їх проведення.

Імуноферментний аналіз на ВЕБ

ІФА - це дослідження (аналіз) венозної крові пацієнтів на антитіла до вірусу Епштейна-Барра. В результаті діагностики в крові пацієнтів з ВЕБ виявляються імуноглобуліни виду IgG або IgM (всього їх 5відов) до одного з 3 антигенів вірусу (раннього, капсидному або ядерного).

Проводять аналіз в імунологічної лабораторії, де у пацієнта беруть близько 10 мл крові з вени. Далі біоматеріал залишають при кімнатній температурі на чверть години протягом яких кров згортається. Згусток акуратно відокремлюють від рідкої частини. Рідина центрифугируют і отримують чисту сироватку (серум) крові. Саме її і піддають подальшому дослідженню.

Ідея методу виникла на підставі даних про те, що в нашому організмі виробляються специфічні антитіла до кожного з видів вірусів і бактерій, що проникають в організм ззовні. Організм розпізнає в них чужака і знищує за допомогою унікальних антитіл, які міцно зчіплюються з антигеном.

Суть аналізу ІФА грунтується саме на цій реакції. Антитіла з прикріпленими до них мітками з'єднуються з антигенами. На мітки наноситься речовина, яка при реакції зі спеціальним ферментом змінює забарвлення зразка. Чим більше таких «ланцюжків», тим інтенсивніше колір біоматеріалу.

Імуноферментний аналіз може проводитися трьома методами:

• Прямий ІФА. Досліджувану рідину поміщають в лунки і залишають приблизно на півгодини, щоб антигени могли прикріпитися до стінок лунки. До сорбованих антигенів додають рідина з позначеними антитілами. Після закінчення потрібного часу (від півгодини до 5 годин), коли антитіла виявили і зв'язалися з антигенами, рідину зливають, лунки акуратно промивають і додають в них фермент. Методом колоризації визначають концентрацію вірусу в одиниці крові.
• Непрямий ІФА. При цьому способі до сорбованих на поверхні лунок антигенів додають досліджувану сироватку крові і мічені антитіла. В результаті отримують 2 виду зв'язок, частина з яких виходить поміченої. Результат залежить від концентрації антигенів в досліджуваному зразку. Чим більше немічених антитіл, тим менше з'єднань, помічених ферментом.

Далі до промитий складу додають спеціальний реагент, за яким і визначають ферментативну активність комплексів антиген-антитіло.

• «Сендвіч». Відрізняється від непрямого методу тим, що спочатку на поверхні сорбують НЕ антигени, а антитіла. До них додають розчин, що містить досліджувані антигени. Після промивання носія додають антитіла з ферментативними мітками. Надлишок антитіл знову видаляють і за допомогою перекису водню отримують забарвлену субстанцію, яку вивчають спектрометрическим методом.

Даний вид аналізу дозволяє не тільки виявити специфічні антитіла і визначити концентрацію антигенів, але і уточнити стадію захворювання. Справа в тому, що різні антигени вірусу Енпштейна-Барра з'являються на різних етапах герпетичної інфекції, а значить і антитіла до них виробляються в певному періоді хвороби.

Так, антитіла IgG до раннього антигену (IgG EA) з'являються в крові через 1-2 тижні після зараження, коли хвороба перебуває в гострій стадії або стадії реактивації вірусу. Зникають імуноглобуліни цього типу через 3-6 місяців. При хронічному перебігу вірусній інфекції таких антитіл особливо багато, а при атипової формі вони відсутні взагалі.

Антитіла IgG до капсидному антигену (IgG VCA) також з'являються рано, протягом перших 4-х тижнів хвороби, але найбільше їх визначається до другого місяця інфекції. У гострій фазі вони виявляються в більшості пацієнтів, але у дітей вони можуть і не з'являтися. При хронічному перебігу хвороби, особливо в періоди реактивації вірусу, кількість IgG VCA особливо велике. Ці антитіла в людини в крові залишаються назавжди, як і сам вірус, що говорить про сформованому імунітет до інфекційного збудника.

Антитіла IgM до капсидному антигену (IgM VCA) можуть з'явитися ще до появи перших ознак хвороби. Особливо велика їх концентрація (титри) в перші 6 тижнів хвороби. Цей вид антитіл характерний для гострої інфекції і реактивації хронічної. Зникають IgM VCA через 1-6 місяців.

Антитіла IgG до ядерного гену (IgG EBNA) можуть говорити про те, що людина раніше безпосередньо зіткнувся в герпетичної інфекцією. У гострій фазі захворювання вони виявляються вкрай рідко, зазвичай з'являючись в період одужання (на 3-10 місяць). У крові їх можна виявити ще через кілька років після перенесеної інфекції.

Виявлення окремих антигенів не дає повної картини захворювання, тому аналізи на різні антитіла повинні проводитися в сукупності. Наприклад, якщо присутні лише IgM VCA, а IgG EBNA не виявляються, мова йде про первинну інфекції.

На жаль, для виявлення первинної герпетичної інфекції або вродженої патології імуноферментного аналізу часто недостатньо. В останньому випадку антитіла можуть взагалі не виявлятися. Як підтверджуючий тесту при первинному захворюванні використовують молекулярне дослідження крові або іншого біологічного матеріалу на вірус Епштейна-Барр.

ПРЦ-аналіз на вірус Епштейна-Барра

Даний аналіз проводять на етапі гострої первинної інфекції, в іншому випадку його результат буде некоректним.

Суть методу ПРЦ (поліразмерной ланцюгової реакції) зводиться до того, що кожен інфекційний збудник має свій набір генів, укладений в молекулі ДНК. ДНК збудника міститься у взятому для дослідження біоматеріалу в невеликих кількостях (самі-то віруси мають мікроскопічні розміри), так що оцінити ситуацію дуже складно. Зате якщо провести специфічну реакцію кількість генетичного матеріалу помітно збільшиться, що дасть можливість назвати збудника хвороби на ім'я.

За допомогою одноразових інструментів беруть матеріал для молекулярного дослідження, який поміщають в спеціальний апарат для проведення аналізу. Прилад являє собою термостат зі спеціальною програмою - термоциклер або ампліфікатор. В апараті кілька десятків разів прокручується повний цикл ПРЦ (близько 2-3 хвилин), який має 3 етапи:

• Денатурація (при температурі 95 градусів відбувається роз'єднання ниток ДНК).
• Відпал (при температурі 75 градусів в досліджуваний матеріал вводяться спеціально заготовлені «затравки» для ВЕБ, які прикріплюються до ДНК вірусу).
• Подовження або розмноження генетичного матеріалу (до затравки при температурі 72 градуси приєднується спеціальний фермент, який відтворює нову ланцюжок ДНК, збільшуючи тим самим кількість генетичного матеріалу удвічі).

Якщо повний цикл поліразмерной реакції прогнати 50 разів, кількість матеріалу збільшиться в 100 разів. А значить, виявити збудника буде набагато простіше.

Аналіз на вірус Епштейна-Барра у дитини

Як ми вже знаємо, вірус Епштейна-Барра може стати причиною розвитку багатьох захворювань. Потрапивши одного разу в організм людини, він залишається його постійним жителем, і тільки злагоджена робота імунної системи не дозволяє йому активно паразитувати всередині клітин.

Майже 95% дорослого населення планети живе з ВЕБ всередині, і більшість з них познайомились з вірусом ще з раннього дитинства. Кому-то він дістався у спадок від матері, а інші отримали вірус від батьків і родичів, які поспішають до дитини з поцілунками, або повітряно-крапельним шляхом в дитячому садку або школі (інфекційні захворювання там зазвичай набувають «вселенські» масштаби).

Маленьким діткам взагалі властиво все тягнуть до рота, а більше число віріонів виявляється саме в слині. І якщо в садку одну і ту ж іграшку облизують кілька дітей, поки вихователі зайняті своїми справами, то не дивно, що вірус так активно поширюється в великих колективах малюків.

ВЕБ можна спокійно назвати хворобою дітей та молоді, адже в підлітковому віці вже половина дітей мають вірус в організмі (а до 30 років і близько 90% дорослих). Хворіють діти в різні вікові періоди по-своєму. До року, поки дитина активно не спілкується з людьми, ймовірність захворіти у нього невелика. Малюк старше року, навіть якщо він не пішов в дитячий сад, стає більш товариським, грає з однолітками на вулиці, робить з мамою активні походи по магазинах і т.д., і ймовірність захопити вірус стає набагато вище.

Але це не привід замикати дитину в 4-х стінах. У віці 1-3 років хвороба в переважній більшості випадків протікає без яких би то не було симптомів, хіба що з незначним підняттям температури і легким нежитем, нагадуючи застуду. Виходить, що чим раніше дитина знайомиться з вірусом, тим легше протікає таке знайомство.

Недобре, якщо дитина перехворіє без появи в крові антитіл IgG VCA, що може говорити про те, що імунітет до вірусу не сформувався, і можлива реактивація вірусу, як тільки імунна система дасть слабину. Причиною є, швидше за все, недосконалість імунної системи маленьких дітей, яка знаходиться в стадії формування кілька років.

Шкільне життя дає ще більше передумов до захворювання, особливо в підлітковому періоді, коли молодь активно практикується в поцілунках. Але у дітей старше 3 років хвороба рідше має безсимптомний лікування. У більшості випадків лікарі стикаються з інфекційних мононуклеоз з властивими йому симптомами.

Попри те, що патологія може мати тривалий перебіг (близько 2 місяців), вона не настільки небезпечна і не вимагає застосування серйозних препаратів. Лікарі призначають протизапальні та противірусні засоби, якщо приєднується бактеріальна інфекція, звертаються за допомогою до антибіотиків. До речі, пеніциліни в цьому випадку застосовувати не рекомендуються в зв'язку з тим, що вони можуть провокувати появу шкірної висипки.

Не треба думати, що якщо дитина або підліток захворів на інфекційний мононуклеоз, значить, у нього в організмі оселився вірус Епштейна-Барра. У хворобі є й інші не настільки часті збудники, наприклад, цитомегаловірус (вірус герпесу 5 типу). Щоб зрозуміти, з чим лікарі мають справу, призначають аналіз на вірус Епштейна-Барра, а при необхідності і інші лабораторні дослідження.

Так само вірно і те, що інфекційний мононуклеоз не є єдиним проявом ВЕБ в дитячому віці. Є й інші захворювання, асоційовані з цим збудником, але в нашому регіоні вони зустрічаються рідко.

Так лімфома Беркітта (а саме їй ВЕБ зобов'язаний своїм виявленням) зустрічається переважно у дітей африканських країн, дуже рідко в Америці, ще рідше в Європі (і то лише на тлі СНІДу). Щелепна пухлина з ураженням лімфовузлів, нирок та інших органів виявляється у малюків 3-8 років.

Назофарингеального рак, значна частина інших лімфом, волохата лейкоплакія рота - все це прояви ВЕБ на тлі сильно зниженого імунітету, що буває при ВІЛ-інфекції та її більш пізній стадії СНІДу.

Вродженийімунодефіцит і приєднання вірусу Епштейна-Барра - небезпечна суміш, яка може привести до розвитку у дитини пролиферативного синдрому. У цьому випадку збільшення кількості В-лімфоцитів призводить до появи грануляту в багатьох органах, що не дає їм нормально функціонувати. Це хвороба з високим рівнем летальності, але на тлі нормального імунітету вона не розвивається.

Можна сказати, що в дитячому віці вірус Епштейна-Барра є небезпечним в основному при імунодефіциті через розвиток різних ускладнень. У більшості випадків все обмежується на інфекційний мононуклеоз. І хоча особливого лікування він не потребує, лікарі вважають за краще все ж встановити природу збудника хвороби, для чого дитині і призначають загальний аналіз крові, імуноферментний аналіз і ПРЦ.

Оскільки в дитячому віці має місце в основному первинна інфекція, то цілком можна обмежитися лише ОАК і ПРЦ, який досить інформативний при вперше виявленому захворюванні.

[ 20 ], [ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ], [ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ], [ 30 ], [ 31 ]